TOPO® TAクローニングで迅速かつ効果的なPCRクローニング
PCR増幅DNA断片（平滑またはAオーバーハング）を40以上の選択肢があるサブクローニング、シーケンシング、発現ベクターにたった5分で直接クローニングします。それにより、最高95%の組換えクローンが得られます。
- 迅速-効率が低いライゲーションや適切な制限酵素の検索の手間を回避できます。
- 効率的-最大95%の組換えクローンを得ることでコロニースクリーニングを最小化します。
- トラブルシューティングツール-TOPO®クローニング技術でクローンができなければ、クローニングは不可能です。
図1 TOPO®クローニングプロトコル。TOPO® PCRクローニングに必要なのは、3つの簡単なステップだけです。PCR生成物とTOPO®クローニングベクターを混合し、5分後、E. coliを形質転換します。
TOPO TAクローニングと従来のクローニング方法の比較
| ステップ | TOPO® TAクローニングキット | TA/UAクローニング | 制限酵素またはカットバックを用いたクローニング |
|---|---|---|---|
| 既存プライマーが使用できますか? | Yes | Yes | No |
| クローニングするためのベクターは準備されていますか? | Yes | Yes | No |
| ライゲーション試薬は含まれていますか? | Yes | Yes | No |
| コンピテントセルを別に準備または購入する必要がありますか? | No、同梱されています。 | 購入：0時間 準備：最大6時間 | 購入：0時間 準備：最大6時間 |
| ライゲーション時間 | 5分 | 1時間 | 2～23時間 |
| 組換え効率 | 95%まで | 60～80% | ～60% |
| クローニングに必要な時間 | 5分 | 1～12時間 | 2～23時間 |
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.