Bigfoot Spectral Cell Sorterのサンプルデータ

28色イムノフェノタイピングパネルを使用したマウス脾臓細胞の特定およびソーティングのゲーティングレイアウト。

ゲートの順番は上から始まり、左から右に進みます。複数の集団が同じプロットで同定された場合、異なるサブポピュレーションのゲートの展開を矢印で示しています。緑色で示された「Subsets identified」は、同定されたサブセットに対する最終的なゲーティング戦略を表し、オレンジ色で示された「Sort targets」は6つのソーティングターゲット（DC、NK、Treg、T CD8+ Naïve、T1B、 およびMZB）を表しています。注：pDCs = 形質細胞様樹状細胞、DCs = 樹状細胞、NKs = ナチュラルキラー細胞、Tregs = 制御性T細胞、T CM = セントラルメモリーT細胞、T EM = エフェクターメモリーT細胞、MZB = 辺縁帯B細胞、T1B = 移行期1 B細胞、 T2B = 移行期2 B細胞、T3B =移行期3 B細胞。

マウス脾臓細胞のソーティング効率と回収された細胞の割合。

ソーティング効率（A）。サンプルを一定の流量で取得し、ソーティング中は1秒あたり2,200～2,800イベントの速度を維持しました。ソーティングの優先度インデックスロジックは脾臓サンプルのターゲットの存在率に基づいており、存在率の低いイベントがもっとも優先されます。DCsは脾臓サンプル中の存在率がより低かったため、もっとも優先順位の高い右3位置に配置され、MZBは左3位置に配置されました。T1Bは右2位置、CD8+ naïveは左2位置、Tregsは右1位置、NKSは左1位置にi配置されました。

ダウンストリーム解析／アプリケーションで回収できるソート細胞の割合（B）。ソーティングされたサンプルをAttune NxTフローサイトメーターで取得し、サンプルを散乱でゲーティングして、ソーティングされたサンプルの細胞濃度（イベント/µL）を取得することで回収率を評価しました。ソーティング後のチューブの重量からソーティング前の空のチューブの重量を減算してサンプル量を得ました。調整した細胞数は細胞濃度とサンプル量を掛けて取得しました。各ソーティングチューブ内のターゲット細胞の数を、各チューブでソーティングされたとしてBigfoot装置が示すターゲット細胞の数で除算しました。その結果が各チューブの計算上の回収率です。

データは、3つの独立した実験の平均±標準偏差で表されています。注記：MZB = 辺縁帯B細胞、NKs = ナチュラルキラー細胞、Tregs = 制御性T細胞、T1B = 移行期1 B細胞、DCs = 樹状細胞。

ソーティングされた脾臓細胞の純度チェック。

ソーティングして総ソーティング数を評価した後、Bigfoot装置でサンプルを解析して純度を評価しました。ゲートはソーティング後の純度評価用に調整されていません。

4-wayプレートソーティングモードのアライメントターゲットのテストパターン。

（A）96ウェルプレート用、 （B）384ウェルプレート用。

正確な液滴滴下。

画像は、96ウェルおよび384ウェルの細胞培養用処理済みプレートのHRP溶液に懸濁させたマルチ液滴イベントソーティング後の、96ウェルおよび384ウェルPCRプレートを示しています。（A）96ウェルプレートでは、A～D行のウェルにそれぞれ4、3、2、および1つの液滴が回収され、濃青から淡青へのグラジエントで示されています。E行のウェルには液滴は回収されず（無色であることで確認）、F～H行にはウェルあたり1滴の液滴が回収されました。（B）384ウェルプレートでは、（Aから始まる）奇数行には液滴が1つ回収され青くなり、（Bから始まる）偶数行には液滴は回収されず無色でした。

ソーティング後のマルチウェルプレートのCHO細胞占有率。

（A）96ウェルプレートおよび（B）384ウェルプレートのCHO細胞占有率を示す代表的な画像。EVOS M7000 Imaging Systemを使用してイメージングしました。Invitrogen EVOS Light Cube, DAPI (357/447 nm)を使用して細胞をイメージングし、Hoechst 33342での染色で可視化しました。

主要チャンネルでの8ピークビーズの分離能。

光散乱とCD16を用いた血液細胞集団の解析。

正常ヒト全血を溶血後、Bigfoot セルソーターで解析しました。（A）SSC x SSC Polarドットプロットは、より高度に偏光解消されたSSCによって、好酸球を赤でハイライトして表示しています。（B）FSC x SSCの等高線プロットは、好酸球の高いFSCおよびSSCシグナルを示しています。これは、好酸球のサイズが他の細胞に比べて大きいためです。（C）未染色サンプルは、BV510チャンネルの好酸球の自己蛍光を示しています。（D）CD16 BV510染色細胞のドットプロットはCD16陰性好酸球を示し、CD16発現に基づいて他の細胞集団をハイライトしています。