定量的リアルタイムPCR（qPCR）における2つのターゲット配列の同時検出は、単一のqPCR反応で行われます。その主な利点は、ピペッティングエラーの影響を最小限に抑え、実験効率を最大化することです。 デュプレックスは、TaqManベースのqPCRケミストリーを使用した場合にのみ可能です。 SYBR Green qPCRケミストリーを使用したターゲットのデュプレックス方法は現在ありません。
あらかじめデザインされたTaqMan Gene Expression AssaysとカスタムのTaqMan Gene Expression Assaysの両方がFAMまたはVIC蛍光レポーター色素で使用できるため、Applied Biosystems TaqMan Gene Expression Assaysは簡単にデュプレックス化できます。 もっとも一般的なデュプレックス反応は、目的のターゲットと内在性コントロールアッセイを同じウェルに結合することです。内在性コントロール遺伝子または一連の遺伝子は、RNAインプットによる実験変動を補正するためのコントロールに一般的に使用され、組織、細胞タイプ全体で比較的一定で適度に豊富な発現レベルを示します。
なぜデュプレックス？
貴重なサンプル—cDNAが貴重な場合、2つのターゲットが単一のcDNAインプットを使用して測定するため、より多くのターゲットを解析できます
コスト—シングルプレックス qPCRと比較して、反応数が半分になるため、マスターミックスの量が多く、プラスチック消耗品の数も少なくなります
精度—目的のターゲットと内在性コントロールが同じウェル内で測定されると、分注の変動が最小限に抑えられるため、データ品質が向上します
ノーマライゼーション—発現結果をノーマライゼーションし、RNAインプット量、逆転写効率、サンプル品質に起因する潜在的バイアスを補正するために、目的のターゲットと同じ内在性コントロールアッセイを使用します
TaqMan Gene Expression Assaysの両面印刷をサポート
アッセイフォーマット | 設計済みのTaqMan Gene Expression Assaysには、FAM、VIC、VIC_PLの3種類のフォーマットがあります。 アッセイはFAMまたはVIC蛍光色素で標識されています。 高発現のターゲット（例えば、18S rRNA、一般的な内在性コントロール）については、対象のターゲットが増幅する前にハウスキーピング遺伝子がqPCR試薬を消費するのを制限するために、プライマーの量が少ないVIC-Primer-Limited（VIC_PL）フォーマットを選択することを推奨します。 TaqMan Gene Expression Assay、FAM |
リソース | アプリケーションノート：TaqMan Gene Expression Assaysを用いた、定量的リアルタイムPCRのデュプレックス反応 TaqMan Gene Expression Assaysのデュプレックス反応の互換性の互換性については、技術的サポートにお問い合わせください。 TaqMan Fast Advanced Master Mixは、二重qPCR用に最適化されています。 より高レベルのマルチプレックqPCR（3プレックスおよび4プレックス反応）に関する情報ついては、マルチプレックスqPCRソリューションのウェブページをご参照ください。 |
関連アプリケーション
データ解析ツール
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ExpressionSuiteソフトウェア—無料でダウンロードできます
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.