フローサイトメトリーによるターゲット RNA の検出
Invitrogen PrimeFlow RNA アッセイは、フローサイトメトリー上での RNA 測定を可能にします。蛍光色素標識抗体による細胞表面および細胞内タンパク質の免疫標識と PrimeFlow を組み合わせましょう。1 つの細胞内におけるタンパク質発現パターンと共に、RNA 転写のダイナミクスを明らかにすることが可能です。
PrimeFlow RNA アッセイの原理
- 遺伝子特異的なオリゴヌクレオチド標的プローブのセットが、ターゲットとなる RNA 配列に結合します。
- 続いて、シグナル増幅のために前段増幅分子と複数の増幅分子がターゲット RNA にハイブリダイズします。
- 蛍光色素で標識されたラベルプローブオリゴヌクレオチドが、1細胞当たり最大 4 つの RNA ターゲットをフローサイトメトリー上で検出します。
PrimeFlow アッセイの特徴的なアプリケーション
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ご注文情報
PrimeFlow RNA アッセイを始めるために、以下の 5 つのステップに従ってください。
| 機器 | 仕様 |
|---|---|
| フローサイトメーター | レーザー：
フィルターセット：
|
| インキュベーター | 40 ± 1 °C を維持可能 |
| メタルヒートブロック | 1.5 mL 微量遠心チューブ用、検証済みのインキュベーター内に設置可能 |
| 温度バリデーションキット | Invitrogen ViewRNA 温度検証キットは、校正された温度計を使用してインキュベーターの温度を検証します。 |
オプション : お客様のターゲットは microRNA でしょうか？この緩衝液は、miRNA の検出においてシグナルを改善し、より感度を向上させます。
オプション：アッセイを 96 ウェルプレートで実施しますか？
- RNA の検出に、現在 4 つのタイプのプローブセットが利用できます。
- 異なるタイプのプローブセットを、RNA の発現レベルに応じて選択してください。
- 細胞表面および細胞内タンパク質の免疫標識によるマルチプレックス解析のために、蛍光標識抗体を選択してください
| ターゲット RNA の発現レベル | 蛍光標識 | レーザー励起波長（nm） | バンドパスフィルター（nm） | 蛍光チャンネル | プローブセットタイプ |
|---|---|---|---|---|---|
| 低 | Alexa Fluor 647 | 633、635 | 660／20 | APC、Alexa Fluor 647、eFluor 660 | タイプ 1 |
| 低 | Alexa Fluor 568 | 561 | 610／20 | PE-eFluor 610、Alexa Fluor 568、PE-Texas Red | タイプ 10 |
| 中～高 | Alexa Fluor 488 | 488 | 530／30 | FITC、Alexa Fluor 488 | タイプ 4 |
| 中～高 | Alexa Fluor 750 | 633、635 | 780／60 | APC-Cy7、APC-eFluor 780、Alexa Fluor 750 | タイプ 6 |
- ポジティブコントロール—適切なアッセイ性能を保証するため、全ての実験でポジティブコントロールのプローブセットを使用してください：ヒト白血球のための RPL13a およびマウス組織のための β アクチン（ACTB）。特定の細胞タイプや他の推奨遺伝子については、PrimeFlow RNA アッセイキット製品マニュアルの付録 5 をご参照ください。
- ネガティブコントロール—ターゲット特異的プローブを省いたサンプルや、目的の細胞内にで発現していないターゲットに対するプローブで標識したサンプル（例えば dapB、細菌遺伝子）などが強く推奨されます。
ステップ 4 のプローブ検索ツールを用いて、ポジティブおよびネガティブコントロールとして使用できるプローブを探してください。
PrimeFlow リソース
関連製品
Resources
Fluorophore and reagent selection guide for flow cytometry
Download Flow Cytometry Protocols Handbook
Spectral Flow Cytometry Fundamentals
Invitrogen eBioscience Resources—Selection guides, Best Protocols, product performance and more.
Intracellular Staining for Flow Cytometry How-To Video—for detecting cytokines and intranuclear markers.
Flow Cytometry Learning Center—Access flow cytometry educational resources for better experiment planning and execution.
Flow Cytometry Panel Builder—Design your flow cytometry panel with this online tool for a simplified, customizable experience to fit your needs.
5 Steps Resources
Support
Flow Cytometry Support Center—Find technical support recommendations for your flow cytometry workflows, including tips for experimental setup and in-depth troubleshooting help.
Flow Cytometry Panel Design Support—Work with one of our technical sales specialists to discuss your experimental needs and guide you through the process.