ELISAの開発および最適化

ELISAの開発において、考慮すべき点が数多くあります。最初に、使用するELISA方式（直接法、間接法、またはサンドイッチ法）を選びます；。各方式によって、標的抗原の捕捉と検出の手段が異なります。ELISAの直接法および間接法では、まずアッセイプレート上に抗原を固定化させます。その後、直接法では標識一次抗体を用いて、また間接法では一次抗体と標識二次抗体を用いて、それぞれ抗原の検出を行います。ELISAサンドイッチ法は最も堅牢な方式とみなされています。その理由は、抗原が二つの一次抗体間で「サンドイッチ」（捕捉および検出）され、その後標識二次抗体を用いて検出される（検出抗体がビオチン化されている場合は、標識ストレプトアビジンを用いて検出される）ことによります。

以下の各動画は、サンドイッチELISAの検出法、および競合ELISAと呼ばれる全く異なるELISA方式についてご紹介します。

各種ELISA方式によって、特異性、感度、単純性、および所要時間（つまり工程数）が異なります。また、それぞれ必要な成分数や変種数が異なります。例えばサンドイッチELISA法では、特異的抗体の相互適合性ペア（いわゆる抗体のマッチドペア）を必要とします。研究者自身によって一からELISA開発が行われるケースの大半は、目的の標的が「新規」であり、マッチドペア抗体が利用できない理由によるものです。新たな抗体産生が求められる場合があります。

ELISA方式やELISAの各コンポーネント（例：マイクロプレート、洗浄バッファー、ブロッキングバッファー、サンプル希釈液、酵素複合体、および基質）の詳細については、「ELISAに関する概要」や、弊社のテクニカルガイド（またはテクニカルハンドブック）をご覧ください。

特殊研究ニーズのために新たなELISA開発の必要性がない限り、通常は市販の各ELISAキットを確認しながら目的の標的に対応した製品お探しください。標的の特異的検出に最適化されたReady-to-useのELISAキットを1,000種類以上も取り揃えております。キットには、抗体コーティング済みのプレート、およびアッセイ実行に必要なコンポーネントが含まれています。各キットは検証および品質検査を通過しているため、手間のかかる最適化工程（後述）を実行する必要はありません。

実用的なELISAが開発された後に、最適化手順を実行してパフォーマンスを向上させることができます。アッセイの各コンポーネントの最適化手順については、以下の各タブをクリックしてください（抗体捕捉から酵素複合体、さらに基質の選択まで網羅しています）。これらの工程は、ELISAサンドイッチ法の使用を前提としています。

最適化手順では、抗体・サンプル・バッファーなどを種々の濃度（希釈度）で試験することが非常に重要です。各成分は別々に記載されていますが、大半のケースではチェッカーボード滴定によって、2種類の成分を同時に最適化可能です（図1参照）。

表2 ELISAにおける種々の系の酵素複合体の推奨濃度 酵素複合体によっては限定的な推奨濃度範囲が指定され事があるため、基質の説明書をご確認ください。